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RIDASCREEN® 17ß-Östradiol
Enzymimmunoassay zur quantitativen Bestimmung von Enzyme immunoassay for the quantitative analysis of In vitro TestLagerung bei 2 - 8°CStorage at 2 - 8°C R-Biopharm GmbH, Darmstadt, GermanyTel.: +49 (0) 61 51 81 02-0 / Telefax: +49 (0) 61 51 81 02-20 5. Zusätzlich benötigte Reagenzien - erforderliches Zubehör. 6 7. Reagenzien und ihre Lagerung. 78. Anzeichen für Reagenzienverfall . 79. Probenvorbereitung. Für weitere Fragen stehen Ihnen gerne zur Verfügung: 10. Testdurchführung . 811. Auswertung .10 (0 61 51) 81 02-25 Frau Dr. Haas-Lauterbach(0 61 51) 81 02-24 Frau Soprani 5. Materials required but not provided.166. Warnings and precautions for the users .167. Storage 8. Indication of deterioration of reagents.179. Preparation of samples .17 sind eingetragene Warenzeichen der R-Biopharm GmbH Hersteller: R-Biopharm GmbH, Darmstadt, Deutschland 14. Reproducibility.2215. Recovery rate .22 RIDA® and RIDASCREEN® are registered trademarks of R-Biopharm GmbH Manufacturer: R-Biopharm GmbH, Darmstadt, Germany 2 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 3 Kurzinformation
1. Allgemeines
RIDASCREEN® 17ß-Östradiol (Art. Nr.: R2301) Der RIDASCREEN® 17ß-Östradiol-Test ist ein kompetitiver Enzymimmunoassay Kompetitiver Enzymimmunoassay zur quantitativen Bestimmung von 17ß- zur quantitativen Bestimmung von 17ß-Östradiol in Rinderplasma.
Östradiol in Rinderplasma.
Alle Reagenzien für die Durchführung des Enzymimmunoassay - inkl. Standards -sind im Testkit enthalten.
Der Testkit ist ausreichend für 96 Bestimmungen (einschließlich Standardbe- 2. Einleitung
stimmungen).
Zur Auswertung benötigt man ein Mikrotiterplatten-Photometer.
17ß-Östradiol gehört zu den natürlichen Sexualhormonen. Der Gehalt an 17ß-Östradiol in Rinderplasma ist sehr niedrig. Bei Kälbern liegt er bei ca. 1-2 pg/ml und bei geschlechtsreifen Rindern bei ca. 1-5 pg/ml. Nur in Plasma von trächtigenRindern bzw. Tieren, die illegal mit Hormonen behandelt wurden, werden Konzentrationen von 100 bis 1.000 pg/ml gefunden.
Die im nationalen Rückstandskontrollplan gesetzlich geforderte Nachweisgrenzefür HPLC-SP und GC-MS ist mit < 0,01 µg/kg (ppb) in Plasma festgelegt.
Probenvorbereitung (für 10 Proben) .ca. 2 h 17ß-Östradiol-Test ist ein kommerzieller Enzym- immunoassay verfügbar, der 17ß-Östradiol-Rückstände in Rinderplasma sehr 3. Testprinzip
Grundlage ist die Antigen-Antikörper-Reaktion. Die Vertiefungen der Mikrotiter- platte sind mit Schaf-Antikörpern gegen Kaninchen-IgG (anti-17ß-Östradiol- Antikörper) beschichtet. Zugegeben werden anti-17ß-Östradiol Antikörper, Standards bzw. Proben und enzymmarkiertes 17ß-Östradiol (Enzymkonjugat).
Freies und enzymmarkiertes 17ß-Östradiol konkurrieren um die 17ß-Östradiol Antikörperbindungsstellen (kompetetiver Enzymimmunoassay). Gleichzeitig werden die anti-17ß-Östradiol Antikörper von den immobilisierten Schaf-Anti- körpern gebunden. Nicht gebundenes, enzymmarkiertes 17ß-Östradiol wird an- schließend in einem Waschschritt wieder entfernt. Der Nachweis erfolgt durch Zugabe von Substrat (Harnstoffperoxid) und Chromogen (Tetramethylbenzidin).
Gebundenes Enzymkonjugat wandelt das farblose Chromogen in ein blaues End-produkt um. Die Zugabe des Stopp-Reagenzes führt zu einem Farbumschlag vonblau nach gelb. Die Messung erfolgt photometrisch bei 450 Referenzwellenlänge ≥ 600 nm); die Extinktion der Lösung ist umgekehrt propor-tional zu der 17ß-Östradiol-Konzentration in der Probe.
4 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 5 4. Packungsinhalt
7. Reagenzien und ihre Lagerung
Mit den Reagenzien einer Packung können 96 Bestimmungen durchgeführt wer- Die Reagenzien bei 2 - 8°C lagern. Den Testkit auf keinen Fall einfrieren.
den (einschließlich Standardbestimmungen). Jeder Testkit enthält: Nicht benötigte Kavitäten zusammen mit dem Trockenmittel im Folienbeutel gutverschlossen aufbewahren und weiterhin bei 2 - 8°C lagern.
1 x Mikrotiterplatte mit 96 Kavitäten (12 Streifen à 8 Einzelkavitäten); Die farblose Chromogenlösung ist lichtempfindlich, deshalb direkte Lichteinwir- beschichtet mit Antikörpern gegen Kaninchen-IgG 0 ppt (Nullstandard), 50 ppt, 200 ppt, 800 ppt, 3.200 ppt, 12.800 ppt17ß-Östradiol in wäßriger Lösung 8. Anzeichen für Reagenzienverfall
1 x Konjugat; Peroxidase-konjugiertes 17ß-Östradiol, Eine Blaufärbung der Chromogenlösung vor Zugabe in die Kavitäten weist auf ei- 1 x Anti-17ß-Östradiol Antikörper, Konzentrat; .schwarzer Verschluß 1 x Substrat (7 ml); enthält Harnstoffperoxid; . grüner Verschluß < 0,6) für den Nullstandard weist ebenfalls auf enthält Tetramethylbenzidin; . blauer Verschluß enthält 1 M Schwefelsäure;. gelber Verschluß 9. Probenvorbereitung
1 x Puffer (50 ml); Konjugat-, Antikörper- und Probenverdünnungspuffer 5. Zusätzlich benötigte Reagenzien - erforderliches Zubehör
− 1 ml Plasma mit 5 ml Ethergemisch (tert. Butylmethylether / Petrolether 30/70 v/v) in einem Glasgefäß 20 min bei Raumtemperatur schütteln − die Extraktionslösung für 60 min bei -25° C (oder 30 min bei -60° C) ausfrieren und den Überstand in ein Glasgefäß dekantieren − den Etherüberstand bei 60° C (z. B. im Wasserbad) evaporieren − den trockenen Rückstand in 400 µl Probenverdünnungspuffer aufnehmen und − je 20 µl pro Kavität im Test einsetzen 20 µl-, 50 µl-, 100 µl- und 200 µl-Mikropipetten Anmerkung:
Die Plasmaproben sowie die fertig aufbereiteten Proben können max. eine
Woche im Kühlschrank aufbewahrt werden.
6. Vorsichtsmaßnahmen
Auf Anfrage ist eine Ergänzende Probenaufarbeitung für Fleischproben
erhältlich.
Das Stopp-Reagenz enthält 1 M Schwefelsäure. Hautkontakt mit dem Reagenzvermeiden.
Nach Ablauf des Verfalldatums (siehe Testkit-Außenetikett unter Expiration) kannkeine Qualitätsgarantie mehr übernommen werden.
Ein Austausch von Einzelreagenzien zwischen Kits verschiedener Chargennum-mern ist nicht möglich.
6 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 7 10. Testdurchführung
Die Standardlösungen liegen in folgenden Konzentrationen vor: 1. Alle Reagenzien vor Gebrauch auf Raumtemperatur bringen.
2. Nicht verwendete Reagenzien sofort wieder bei 2 - 8°C lagern.
3. Ein Eintrocknen der Kavitäten zwischen den Arbeitsschritten vermeiden.
4. Die Reproduzierbarkeit der Testergebnisse hängt in starkem Maße vom gleichmäßigen Waschen der Kavitäten ab. Die beschriebenen Waschsequen- 5. Bei allen Inkubationen direkte Sonneneinstrahlung vermeiden und deshalb die 1. So viele Kavitäten in den Halterahmen einsetzen, wie für alle Standards und Das 17ß-Östradiol-Enzymkonjugat (Konjugat, Flasche mit rotem Verschluß) liegt Proben in Doppelbestimmung benötigt werden. Die Positionen der Standards als Konzentrat vor. Da das rekonstituierte Konjugat nur begrenzte Haltbarkeit aufweist, immer nur soviel Konjugat mit Puffer verdünnen, wie unmittelbar benötigt 2. Je 50 µl verdünnte Enzymkonjugat-Lösung in die entsprechenden Kavitäten wird. Das Konjugat vor Entnahme vorsichtig durchmischen. Um das gebrauchsfertige Konjugat herzustellen, muß das Konzentrat 1:11 mit Puffer 3. 20 µl der Standardlösung bzw. der nach Abschnitt 9. vorbereiteten Proben als verdünnt werden (z. B. 200 µl Konzentrat + 2,0 ml Puffer, ausreichend für 4 Doppelbestimmung in die entsprechenden Kavitäten pipettieren.
4. Je 50 µl verdünnte anti-17ß-Östradiol Antikörperlösung in die entsprechenden Kavitäten pipettieren, durchmischen und 2 h bei Raumtemperatur inkubieren.
5. Die Kavitäten durch Ausschlagen der Flüssigkeit leeren und die Restflüssig- keit durch kräftiges Ausklopfen (dreimal hintereinander) auf saugfähigen Die anti-17ß-Östradiol Antikörper liegen als Konzentrat vor (Flasche mit Labortüchern entfernen. Die Kavitäten mit jeweils 200 µl dest. Wasser wa- schwarzem Verschluß). Da die rekonstituierte Lösung nur begrenzte Haltbarkeit schen. Diesen Vorgang zweimal wiederholen.
aufweist, immer nur soviel Antikörperkonzentrat mit Puffer verdünnen, wie unmit- 6. Je 50 µl Substrat und unmittelbar danach je 50 µl Chromogen in die Kavitäten telbar benötigt wird. Das Antikörperkonzentrat vor Entnahme gut durchmischen.
pipettieren. Durchmischen und 30 min bei Raumtemperatur im Dunkeln Um das gebrauchsfertige Antikörperkonzentrat herzustellen, muß das Konzentrat 1:11 mit Puffer verdünnt werden (z. B. 200 µl Antikörperkonzentrat + 2,0 ml Puffer, 7. Je 100 µl Stopp-Reagenz in jede Kavität pipettieren und durchmischen. Die ausreichend für 4 Mikrotiterstreifen).
Extinktion bei 450 nm innerhalb von 60 min nach Zugabe des Stopp-Rea-genzes messen. Der Abgleich des Nullwertes erfolgt gegen Luft.
10.4. Antikörper-beschichtete Mikrotiterstreifen Den Folienbeutel an der Querseite entlang der Verschlußleiste aufschneiden. Diebenötigten Kavitäten zusammen mit dem Halterahmen entnehmen. Die nicht be-nötigten Kavitäten zusammen mit dem Trockenmittel im Folienbeutel gut ver-schlossen aufbewahren und weiterhin bei 2 - 8°C lagern.
8 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 9 11. Auswertung
Die Mittelwerte der erhaltenen Extinktionswerte der Standards bzw. der Proben durch den Extinktionswert des ersten Standards (Nullstandard) teilen und mit 100 multiplizieren. Den Nullstandard somit gleich 100 % setzen und die Extinktions-werte in Prozent angeben.
Die errechneten Werte für die Standards in einem Koordinatensystem aufhalblogarithmischem Millimeterpapier gegen die 17ß-Östradiol-Konzentration in % maximum absorbance
[ng/l] auftragen. Die Eichkurve sollte im Bereich von 50 Die der Extinktion der jeweiligen Proben entsprechende 17ß-Östradiol - 12800 [ng/l]
Konzentration in ng/l aus der Eichkurve ablesen.
17-ß-Östradiol (ppt)
Bitte beachten:
Um die in den Proben enthaltene tatsächliche 17ß-Östradiol-Konzentration in
ng/l zu erhalten, muß die aus der Eichkurve abgelesene Konzentration noch
Abb. 1: Eichkurve eines RIDASCREEN® 17ß-Östradiol Testkits mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor multipliziert werden. Beim
Arbeiten nach den angegebenen Vorschriften gelten folgende
12. Sensitivität
Verdünnungsfaktoren:
Die mittlere untere Nachweisgrenze des RIDASCREEN® 17ß-Östradiol-Tests liegtbei 50 ng/l. Bezogen auf das Probenvorbereitungsprotokoll resultiert daraus eineNachweisgrenze von 20 ng/l (20 ppt) für Rinderplasma.
13. Spezifität
Die Spezifität des RIDASCREEN® 17ß-Östradiol-Tests wurde durch Bestimmungder Kreuzreaktivität zu entsprechenden Substanzen ermittelt.
17β-Östradiol . 100 %Ostradiol-3-benzoat . 50 %17α-Östradiol . 0,9 %Östron . 0,7 %Trenbolon. 1,0 %19-Nortestosteron . 0,5 %Testosteron . < 0,25 %Zeranol. < 0,25 %DES. < 0,25 %Östriol. < 0,1 % 10 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 11 14. Reproduzierbarkeit
Die Präzision innerhalb einer Serie wurde aus den Resultaten von drei verschie-denen Experimenten ermittelt. Abbildung 2 zeigt das Inter-Assay-Präzisionsprofilvon RIDASCREEN® 17ß-Östradiol. Die Variationskoeffizienten (% Extinktionen, ermittelt mit den Standards, sind gegen die entsprechenden 17ß- RIDASCREEN® 17ß-Östradiol
Östradiol-Konzentrationen aufgetragen. Die Variationskoeffizienten sind über dengesamten Bereich der Kurve konstant und so niedrig, daß eine hohe Enzyme immunoassay for the quantitative analysis of Reproduzierbarkeit der Meßergebnisse gewährleistet ist.
15. Wiederfindungsrate
Brief information
Die mittlere Wiederfindungsrate von künstlich kontaminierten Plasmaproben RIDASCREEN® 17ß-Östradiol (Art. No.: R2301) Competitive enzyme immunoassay for the quantitative analysis of 17ß-estradiol inbovine plasma.
All reagents required for the enzyme immunoassay - including standards - arecontained in the test kit.
The test kit is sufficient for 96 determinations (including standards).
A microtiter plate spectrophotometer is required for quantitation.
sample preparation (for 10 samples) . approx. 2 htest implementation . approx. 3 h(regardless of the number of samples) 12800 [ng/l]
17-ß-Östradiol (ppt)
Abb. 2.: Inter-Assay-Präzisionsprofil von RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 17α-Estradiol. 0,9 %Estron. 0,7 %Trenbolon. 1,0 %19-Nortestosterone . 0,5 %Testosterone . < 0,25 %Zeranol. < 0,25 %DES. < 0,25 %Estriol . < 0,1 % 12 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 13 1. Intended use
4. Reagents provided
RIDASCREEN® 17ß-Östradiol is a competitive enzyme immunoassay for the Each kit contains sufficient materials for 96 measurements (including standard quantitative analysis of 17ß-estradiol residues in bovine plasma.
1 x Mikrotiter plate with 96 wells (12 strips à 8 removable wells each); 2. General
0 ppt (zero standard), 50 ppt, 200 ppt, 800 ppt, 3,200 ppt, 12,800 ppt 17ß-estradiol is a natural sexual hormone. The levels of 17ß-estradiol in bovineplasma from peripheral blood are very low. In calves not more than 1-2 pg/ml are present and in cycling females the concentration of 17ß-estradiol is 1-5 pg/ml.
1 x Conjugate; peroxidase conjugated 17ß-estradiol, Only in plasma of pregnant animals or in plasma of animals illegally treated with anabolic agents, levels in the range of 100 to 1,000 pg/ml can be found. In the 1 x Anti-17ß-estradiol antibody, concentrate; .black cap german residue control plan the legally demanded detection limit in bovine plasma 1 x Substrate (7 ml); contains urea peroxide; .green cap for HPLC-SP and GC-MS is < 0.01 µg/kg (ppb).
The RIDASCREEN® 17ß-Östradiol assay is a commercially available enzyme immunoassay for the sensitive detection of 17ß-estradiol residues in bovine 1 x buffer (50 ml); conjugate, antibody and sample dilution buffer 3. Test principle
5. Materials required but not provided
The basis of the test is the antigen-antibody reaction. The microtiter wells arecoated with sheep antibodies directed against rabbit IgG (anti-17ß-estradiol antibody). Anti-17ß-estradiol antibodies, 17ß-estradiol enzyme conjugate andstandards or sample solution are added. Free and 17ß-estradiol enzyme − microtiter plate spectrophotometer (450 nm) conjugate compete for the 17ß-estradiol antibody binding sites (competitive enzyme immunoassay). At the same time, the anti-17ß-estradiol antibodies are also bound by the immobilized sheep antibodies. Any unbound enzyme conjugate is then removed in a washing step. Enzyme substrate (urea peroxide) and chromogen (tetramethylbenzidine) are added to the wells and incubated. Bound − 20 µl-, 50 µl-, 100 µl- and 200 µl-micropipettes enzyme conjugate converts the colorless chromogen into a blue product. Theaddition of the stop reagent leads to a color change from blue to yellow. The measurement is made photometrically at 450 nm (optional reference wavelength ≥600 nm). The absorption is inversely proportional to the 17ß-estradiol con- 6. Warnings and precautions for the users
The stop reagent contains 1 M sulfuric acid. Avoid contact of the reagent with theskin.
Do not use RIDASCREEN® 17ß-Östradiol kit past the expiration date on the kitlabel. Dilution or adulteration of these reagents may result in loss of sensitivity.
Do not interchange individual reagents between kits of different lot numbers.
14 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 15 7. Storage instructions
Store the kit at 2 - 8°C. DO NOT FREEZE.
10. Test implementation
Return any unused microwells to their original foil bag and reseal them togetherwith the desiccant provided.
The colorless chromogen is light sensitive, therefore, avoid exposure to directlight.
1. Bring all reagents to room temperature before use.
2. Return all reagents to 2 - 8°C immediately after use.
3. Do not allow microwells to dry between working steps.
8. Indication of deterioration of reagents
4. Reproducibility in any EIA is largely dependent upon the consistency with which the microwells are washed. Carefully follow the recommended washing Any coloration of the chromogen solution is indicative of deterioration and the sequence as outlined in the EIA test procedure.
5. Avoid direct sunlight during all incubations. Covering the microtiter plates is A value of less than 0.6 absorbance units (A 9. Preparation of samples
The 17ß-estradiol enzyme conjugate (enzyme conjugate, bottle with red cap) isprovided as a concentrate. Since the diluted enzyme conjugate has a limited stability, only the amount which actually is needed should be reconstituted. Before pipetting, the enzyme conjugate should be shaken carefully. For reconstitution, the extract 1 ml bovine plasma with 5 ml ether mixture (tert. Butylmethylether / conjugate concentrate is diluted 1:11 in buffer (e. g. 200 µl conjugate concentrate petroleum ether 30/70 v/v) in a glass tube by shaking thoroughly at room + 2.0 ml buffer, sufficient for 4 microtiter strips).
− freeze the extracted solution at -25° C for 60 min (or at -60° C for 30 min) decant the ether supernatant into a glass tube and evaporate it at 60° C The anti-17ß-estradiol antibody (bottle with black cap) is provided as a redissolve the dried residue in 400 µl sample dilution buffer and mix concentrate. Since the diluted antibody has a limited stability, only the amount which actually is needed should be reconstituted. Before pipetting, the antibody employ 20 µl each per well in the assay should be shaken thoroughly. For reconstitution, the antibody is diluted 1:11 in buffer (e. g. 200 µl antibody + 2.0 ml buffer, sufficient for 4 microtiter strips).
Plasma samples, as well as sample extracts obtained, can be stored at
2 - 8° C for up to one week.
The foil bag is cut open along the transverse side beyond the zip. The required An additional sample preparation procedure for meat samples is available on
wells are extracted, together with the frame. Those wells not required are kept, request.
together with the drying agent, well sealed in the foil bag and should continue tobe stored at 2 - 8°C.
16 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 17 The 17ß-estradiol standards are provided ready for use in the following % maximum absorbance
1. Insert a sufficient number of wells into the microwell holder for all standards 12800 [ng/l]
and samples to be run in duplicate. Record standard and sample positions.
2. Add 50 µl of diluted enzyme conjugate to the bottom of each well.
17-ß-Östradiol (ppt)
3. Add 20 µl of standard or prepared sample to separate duplicate wells.
4. Add 50 µl of the diluted anti-17ß-estradiol antibody solution to each well. Mix thoroughly and incubate for 2 h at room temperature.
11. Results
5. Pour the liquid out of the wells and tap the microwell holder upside down vig- orously (three times in a row) against absorbent paper to ensure complete re- The mean values of the absorbance values obtained for the standards and the moval of liquid from the wells. Fill all wells with 200 µl of distilled water and samples are divided by the absorbance value of the first standard (zero standard) pour out the liquid again. Repeat two more time.
and multiplied by 100. The zero standard is thus made equal to 100 % and the 6. Add 50 µl of substrate and 50 µl of chromogen to each well. Mix thoroughly absorbance values are quoted in percentages.
and incubate for 30 min at room temperature in the dark.
7. Add 100 µl of the stop reagent to each well. Mix well and measure the absor- bance at 450 nm (≥ 600 nm reference filter optional) against an air blank. Read within 60 minutes after addition of stop solution.
The values calculated for the standards are entered in a system of coordinates onsemilogarithmic graph paper against the 17ß-estradiol concentration in [ng/l]. Thecalibration curve should be virtually linear in the 50 - 3,200 ng/l (ppt) range. The17ß-estradiol concentration in ng/l corresponding to the extinction of each samplecan be read from the calibration curve Please note:
In order to obtain the 17ß-estradiol concentration in ng/l actually contained
in a sample, the concentration read from the calibration curve must be
further multiplied by the corresponding dilution factor. When working in
accordance with the regulation stated, the dilution factors are as follows:
18 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 19 1.: Calibration curve of a RIDASCREEN® 17ß-Östradiol kit 14. Reproducibility
12. Sensitivity
The precision within a series was determined from the results of three differentexperiments. Fig. 2 shows the interassay precision profile of RIDASCREEN® 17ß- The mean lower detection limit of the RIDASCREEN® 17ß-Östradiol assay is Östradiol. The coefficients of variation (% CV) obtained for the absorption values about 50 ng/l. According to the test preparation record, the detection limit is of the standards are entered against the corresponding 17ß-estradiol 20 ng/l (20 ppt) testosterone in bovine plasma.
concentrations. The coefficients of variation are so low with respect to the wholerange of the figure that a high reproducibility of the results is ensured.
13. Specificity
The specificity of the RIDASCREEN® 17ß-Östradiol assay was established by 15. Recovery rate
analyzing the cross-reactivity to corresponding substances: With spiked plasma samples, the recovery rate is 85 % + 12 %.
Fig. 2.: Interassay precision profile for RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 12800 [ng/l]
17-ß-Östradiol (ppt)
Estradiol-3-benzoate . 50 %17α-Estradiol . 0,9 %Estron . 0,7 %Trenbolon . 1,0 %19-Nortestosterone . 0,5 %Testosterone. < 0,25 %Zeranol . < 0,25 %DES . < 0,25 %Estriol. < 0,1 % 20 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 21 Appendix
1. Sauerwein, H., Meyer, H.H.D.; J. Anim. Sci. 67: 206-212 (1989): Androgen and estrogen receptors in bovine skeletal muscle: relation tosteroid induced allometric muscle growth 2. Pope, G.S.; in: Factors influencing fertility in the postpartum cows. Marinus Nijhoff, The Hague 248-276 (1982):oestrogens and progesterone in plasma and milk of post-partum dairy cows.
3. Hoffmann, B. et al.; in: The fetus and birth (Ciba Fdn. Symp. 47: 107-118 (1977):Endocrine relationship during late gestation and parturition in the cow.
4. Rattenberger, E., Matzke, P.; Arch. F. Lebensmittelhyg. 40: 112-115 (1989): Nachweis einer illegalen Anabolikabehandlung mit den körpereigenenHormonen Testosteron und Östradiol R-Biopharm makes no warranty of any kind, either expressed or implied,except that the materials from which its products are made are of standardquality. If any materials are defective, R-Biopharm will provide a replacementproduct. There is no warranty of merchantability of this product, or of thefitness of the product for any purpose. R-Biopharm shall not be liable for anydamages, including special or consequential damage, or expense arisingdirectly or indirectly from the use of this product.
22 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 RIDASCREEN® 17ß-Östradiol 99-07-27 23

Source: http://www.bio-excellent.cn/cms/upfile/17B_%E9%9B%8C%E4%BA%8C%E9%86%87%E8%8B%B1%E6%96%87.pdf