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COMPARAÇÃO IN VITRO DOS EFEITOS DOS FOTOSSENSIBILIZADORES HPIX E
PPIX EM PDT SOBRE TRICHOPHYTON RUBRUM COM LED AZUL
Rogerio R. Ramos1, Dora I. Kozusny-Andreani1, Mauricio. S. Baptista2 , Adjaci F.
Uchoa1,2
1Universidade Camilo Castelo Branco, Instituto de Engenharia Biomédica, São José dos Campos/SP. 2USP- IQ/Departamento, Departamento de Bioquímica, São Paulo/SP. rogerio_enfer@hotmail.com1, doraines@unicastelo.br1, baptista@iq.usp.br2, adjaci.uchoa@hotmail.com1,2
Resumo- Hematoporfirina IX (HP IX) e Protoporfirina IX (PP IX) estão entre os Fotossensibilizadores mais
utilizados em Terapia fotodinâmica (PDT), neste trabalho foi estudado a atividade destes Trichophyton
rubrum
irradiado em (≈400 nm) com LED. Foi empregada uma cepa (ATCC 28188). Foi possível comparar a
Unidade Formadora de Colônias em todos os grupos. No G5 (HPIX) e G6 (PPIX) comparando com o G1
(grupo controle) percebeu-se uma grande redução nas Unidades Formadora de Colônia, apresentando
melhor resultado no G6 (PPIX). Concluiu-se que a terapia fotodinâmica mediada por HPIX e PPIX
juntamente com LED apresentaram efetiva ação, mas sugerem que para total inibição de Trichophyton
rubrum
pelos fotossensibilizadores HPIX e PPIX deveria ser empregado um tempo maior de exposição.
Palavras-chave: Trichophyton rubrum. Terapia fotodinâmica. Fotossensibilizadores.
Área do Conhecimento: Microbiologia
Introdução
4.000 rpm, este procedimento foi repetido cinco A onicomicose é uma infecção fúngica das unhas dos pés e das mãos. O agente etiológico concentração de 1mg/mL-1, dissolvidos em Trichophyton rubrum (BAUDRAZ-ROSSELET et Dimetilsulfóxido (DMSO) e agitados em vórtex por 5 minutos. Os Fs ficaram mantidos sob proteção O Trichophyton rubrum é um fungo que parasita tecidos queratinizados (pele, pêlos e Os tratamentos foram realizados em triplicata. unhas). A onicomicose é muito persistente e Os grupos foram: G1 (grupo controle), nesse muitas vezes resistente a drogas antifúngicas grupo não foi realizado nenhum tratamento, foi adicionado 100µL do fungo 102 + 1050µL de meio Em resposta a crescente resistência aos TSB e sem luz. No G2 (F+L+), foi adicionado antifúngicos, a terapia fotodinâmica (PDT) surge 100µL do fungo 102 + 1000µL de meio TSB + para atuar como um tratamento alternativo e irradiação de luz. No G3 (F+DMSO+L-) foram eficaz. O presente estudo teve como objetivo adicionados 50µL do DMSO + 1000µL de meio comparar in vitro o efeito fotodinâmica dos TSB + 100µL do fungo 102 e sem luz. Já no G4 fotossensibilizadores (Fs) HPIX e PPIX em PDT (F+DMSO+L+) foram adicionados 50µL do DMSO sobre Trichophyton rubrum com Led azul com λ de + 1000µL de meio TSB + 100µL do fungo 102 + Metodologia
(F+PPIX+L+) foram adicionados 50µL de cada dispersão dos fotossensibilizadores + 1000µL de Foi empregada a cepa Trichophyton rubrum meio TSB + 100µL do fungo 102 + irradiação de (ATCC 28188). Os meios utilizados foram o Agar Sabouraud-Dextrose (ASD) e Triptecaseina de As irradiações de luzes foram com LED azul soja (TSB). Para o cultivo a superfície micelial do com λ de 400nm. Cada grupo foi trabalhado em 12 fungo foi removida com auxilio de Swab estéril e tempos de 10 em 10 minutos até completar duas inoculada em 100 mL de meio TSB, incubado 72h horas. Após o 12º tempo de 10 minutos dos a 37°C sob agitação (150rpm). Após cultivo, a grupos 1 a 6 foram aspirados 50 µL e dispersado suspensão microbiana foi centrifugada e o em placa de Petri e incubado a 35°C durante 48 precipitado ressuspendido em solução de NaCl (0,5%) e novamente centrifugado por 5 minutos a Encontro de Pós-Graduação e Iniciação Científica – Universidade Camilo Castelo Branco Tabela 1 - Grupos utilizados no experimento. Tabela 2- Resultados dos grupos após duas GRUPOS DESCRIÇÃO DO PROCEDIMENTO
COMPARAÇÃO DAS MÉDIAS DOS
TRATAMENTOS DOS GRUPOS
G3 G4 G5 G6
As siglas (L) luz e (DMSO) dimetilsufóxido. Os sinais (+) presença e o (-) ausência. Em todos os grupos foram adicionados o fungo (Trichophyton rubrum).
Resultados
Na tabela 2, estão apresentados os resultados da sobrevivência de Trichophyton rubrum. Os gráficos 1 e 2, apresentam a atividade antifúngica dos Fs. Houve redução de Trichophyton rubrum nos grupos 4, 5 e 6, pela exposição da luz Led Realizado em doze tempo (minuto) de 10 em 10 minutos até completar duas horas de tratamento. Verificou-se baixa toxicidade do solvente DMSO. No G5 (HPIX) e no G6 (PPIX com o grupo Discussão
controle verificou-se que houve redução das UFCs Estudos indicaram que o Trichophyton rubrum é responsável por 90% das onicomicoses, sendo um possível alvo da PDT, tal como cerca de 50% do crescimento dos fungos podem ser inibidos in vitro, já que pela terapia convencional com antimicóticos o fungo é altamente persistente, (KAMP, et al., 2005). Assim, vários estudos relacionados com experiências in vitro apoiam a sua utilidade para o tratamento de infecções.
Conclusão

Os resultados sugerem que para total inibição de Trichophyton rubrum pelos Fs HPIX e PPIX Gráfico 1 – O G1 controle (fungo sem nenhum tratamento), G2 (fungo apenas com irradiação de luz) e G3 (fungo + DMSO sem exposição de luz), realizado em doze tempo (minuto) de 10 em 10 minutos até completar Referências

- BAUDRAZ-ROSSELET, F.; RUFFIEUX, C.;
LURATI, M. et al. Onychomycosis insensitive to
systemic terbinafine and azole treatments reveals
nondermatophyte moulds as infectious agents.
Dermatol. 220(2): 164–168, 2010.
- FAERGEMANN, J.; BARAN, R. Epidemiology,
clinical
onychomycosis. Br J Dermatol. 149(Suppl. 65): 1-
4, 2003.
- KAMP, H.; TIETZ, H. J.; LUTZ, M.; et al.
Gráfico 2 – O G4 (fungo + DMSO com irradiação de Antifungal effect of 5-aminolevulinic acid PDT luz), G5 (fungo + HPIX com irradiação de luz) e G6 inTrichophyton rubrum. Blackwell Publishing Ltd. (fungo + PPIX com irradiação de luz), realizado em doze Mycoses. 48: 101–107, 2005.
tempo (minuto) de 10 em 10 minutos até completar duas horas de tratamento. Encontro de Pós-Graduação e Iniciação Científica – Universidade Camilo Castelo Branco

Source: http://unicastelo.br/epginic/arquivos/anais/epg/engenharia/413%20-%20EPG063.pdf

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Marie-Noëlle DELYFER Born on August 15, 1974 Professional address: Retina, Uveitis and Neuro-Ophthalmology Unit, Department of Ophthalmology, Bordeaux University Hospital, FRANCE tel: +33 556 795 741/ +33 556 795 864 fax: +33 5 56 794 758 email: marie-noelle.delyfer@chu-bordeaux.fr CURRENT POSITION:  Associate Professor in Ophthalmology, Department of Ophthalmology, Bordea

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