En 1/2009

ENDODONCIA • Volumen 27 • Número 1 • Enero-Marzo 2009 Artículo Investigación
Acción antimicrobiana in vitro de distintasmedicaciones sobre Enterococcus faecalis yActinomyces israeliiL. Rodríguez-Varo1, J. Pumarola2, C. Canalda3 1DDS, PhD. 2DDS, DMD, PhD, Associated Professor. 3DDS, DMD, PhD, Professor. Dental Pathologyand Therapeutics, Faculty of Dentistry, University of Barcelona Correspondencia: Dr. Carlos Canalda, C/ Mallorca 173, E 08036 Barcelona. E-mail: [email protected]
RESUMEN
Objetivo: Se comparó in vitro la acción antimicrobiana de diversas medicaciones intraconducto frente a Enterococcus faecalis y Actinomyces
israelii.
Material y métodos: para evaluar las zonas de inhibición microbiana se utilizó el test de difusión en agar frente a diversas pastas, incluyendo
una pasta con base de metronidazol (Grinazole® ), una pasta con base de dexametasona, tiretrocina, polimixana y neomicina (Septomixine forte®)
y otra de hidróxido de calciio (Calcipulpe®) y paroclorofenol alcanforado (KRI-3®), frente a E. faecalis y A. israelii.
Resultados: La acción inhibitoria frente a E. faecalis fue significativamente mayor (p< 0,05) con Septomixine forte® (30,7 mm) seguido de KRI-
3® (22,5 mm), Calcipulpe® (16,6 mm) y Grinazole® (11,4 mm). La inhibición microbiana frente a E. israelii fue significativamente mejor con
Septomixine forte® (p< 0,05) (40,1 mm) seguido de KRI-3® (36,6 mm), Grinazole® (7,6 mm) y Calcipulpe® (6 mm).
Conclusión: Septomixine forte® fue la pasta antibiótica más efectiva frente a E. faecalis y A. israelii comunmente hallados en las infecciones
endodóncicas.
PALABRAS CLAVE
Acción antimicrobiana; Medicación intraconducto.
ABSTRACT
Objective: To compare in vitro antimicrobial effect of different root canal medicaments on Enterococcus faecalis and Actinomyces israelii.
Methodology: The agar diffusion test was used to assess the bacterial growth inhibition zones achieved with different antibiotic pastes, including a metronidazole-
containing paste (Grinazole®), a combination of dexamethasone, tyrothricin and both polymyxin and neomycin sulfate (Septomixine forte®), calcium hydroxide
(Calcipulpe®), and camphorated paramonochlorophenol (Kri-3®) against E. faecalis and A. israelii.
Results: Antibacterial inhibition against E. faecalis was significantly (P<0.05) greater with Septomixine forte® (30.7 mm) followed by Kri-3® (22.5 mm), Calcipulpe®
(16.6 mm), and Grinazole® (11.4 mm). Bacterial inhibition against A. israelii was also significantly greater (P<0.05) with Septomixine forte® (40.1 mm) followed
by Kri-3® (36.6 mm), Grinazole® (7.6 mm), and Calcipulpe® (6 mm).
Conclusions: Septomixine forte® was the most effective antibiotic paste against E. faecalis and A. israelii commonly found in endodontic infections.
KEY WORDS
Antimicrobial activity; Root canal medication.
Endodoncia 2009; 27 (Nº 1):7-12
L. Rodríguez-Varo, J. Pumarola, C. Canalda INTRODUCCIÓN
antibióticas, hidróxido de calcio y paraclorofenol alcanforadofrente a las especies bacterianas E. faecalis y A. israelii. En el tratamiento de la patología pulpo-periapical, uno de los objetivos fundamentales del tratamiento endodóncico con-siste en conseguir la máxima eliminación de los microorga- MATERIAL Y MÉTODO
nismos residentes en los conductos radiculares de los dientesa tratar.
Preparación de los cultivos bacterianos
El medio que permite cumplir mayormente este objetivo es la combinación de la instrumentación (limpieza mecánica Cada una de las bacterias liofilizadas de E. faecalis 19916 de las paredes dentinarias internas del canal mediante ins- CCUG y de A. israelii 961120 CCUG (Culture Collection, Uni- trumental endodóncico estandarizado) y la irrigación de los versity of Göteborg. Dept. of Clin. Bacteriology, Guldhedsga- conductos mediante soluciones que posean capacidad anti- tan 10 S-413 46 Göteborg, Suecia) fueron activadas en 1ml de séptica, pero que no sean excesivamente irritantes para el teji- El medio TSB (Tryptic Soy Broth) (Scherlau Chemie S.A., En el tratamiento de los conductos infectados, con o sin Barcelona, España) se preparó mezclando 1 litro de agua des- complicación periapical, diversos investigadores y clínicos tilada con 30 g de polvo, se distribuyó en tubos y se esterili- recomiendan realizar el tratamiento de los mismos en más de zó en el autoclave durante 15 minutos a 121º C y 3 atmósferas una cita(2-7) introduciendo una medicación en el interior del de presión. A continuación, utilizando una pipeta estéril de conducto para aumentar la desinfección del mismo.
100/1000 µl tomamos 1ml del medio líquido y lo vertimos en Durante décadas se han usado gran variedad de sustancias un tubo de ensayo estéril con cada una de las dos bacterias.
antibacterianas como medicación temporal haciendo depen- Las bacterias se incubaron a 37º C en la estufa durante 18-20 der el éxito del tratamiento en dicha medicación temporal: eugenol, paramonoclorofenol alcanforado, formocresol, glu-taraldehído, penicilina, estreptomicina, corticoides, hidróxi- Verificación de los cultivos bacterianos puros
do de calcio, etc. Todas las medicaciones intracanal, cuyo efec-to deseable en el tratamiento de canales radiculares infecta- Para verificar los cultivos puros de las bacterias antes de dos es la inhibición del crecimiento bacteriano, suelen pose- comenzar la siembra definitiva realizamos una siembra de er mayor irritabilidad y poca compatibilidad con los tejidos prueba tomando 4,5 ml de TSB más 0,5 ml de cada especie bac- periapicales. Por esta razón el hidróxido de calcio, por sus pro- teriana por separado. Se incubaron las placas a 37º C duran- piedades bactericidas, su capacidad osteogénica(8) para indu- te dos horas al cabo de las cuales ya habíamos obtenido el cre- cir la formación de tejido duro y su buena tolerancia biológi- cimiento exponencial de cada una de las bacterias. De esta ca es el más usado en la actualidad. No obstante, Sato y cols.(9) manera las verificamos observándolas en muestras prepara- utilizaron experimental y clínicamente distintas pastas anti- das con el método de tinción gram para el microscopio ópti- co. A la vez sembramos por escobillón 2 placas de Petri que Las investigaciones microbiológicas de los últimos cinco incubamos durante 2 horas en la estufa a 37º C para verificar años reflejan que en los fracasos endodóncicos hay una mayor de un modo macroscópico la muestra.
prevalencia de las especies bacterianas Enterococcus faecalis yActinomyces israelii(10,11).
Preparación de los medios de cultivo
E. faecalis puede sobrevivir en condiciones ambientales en las que el pH es similar o superior a 11.5, valores similares a Preparamos las placas de Petri con el medio de TSA. El los que proporciona el hidróxido de calcio. Holland(12) preco- medio TSA se obtiene mezclando 40 g de polvo de TSA (Tryp- nizó en los fracasos de las apicoformaciones añadir paramo- tic Soy Agar) (Scherlau Chemie S.A., Barcelona, España) con noclorofenol alcanforado al hidróxido de calcio para comple- 1 litro de agua destilada, se deja embeber y se lleva a ebulli- ción hasta disolver totalmente el agar. Se esteriliza en auto- El objetivo de esta investigación fue determinar la acción clave durante 15 minutos a 121ºC y 3 atmósferas de presión.
antibacteriana de diversos preparados comerciales de pastas Tras su enfriamiento y antes de su solidificación se colocó el Endodoncia 2009; 27 (Nº 1):7-12
Acción antimicrobiana in vitro de distintas medicaciones sobre Enterococcus faecalis y Actinomyces israelii Composición de los medicamentos
Halos inhibitorios frente a E. faecalis (expresa-
Halos inhibitorios frente A. israelii (expresados
dos en milímetros)
en milímetros)
medio en las placas de Petri en la campana de flujo vertical se fueron colocando cada una de las cuatro sustancias selec- para evitar la posible contaminación.
cionadas: Calcipulpe® (Septodont, Saint Maur, Francia), Sep-tomixine forte® (Septodont, Saint Maur, Francia), Grinazole® Siembra bacteriana
(Septodont, Saint Maur, Francia) y Kri 3® (Pharmachemie AG,Zurich, Suiza). Su composición se muestra en la Tabla 1.
Tras la correcta comprobación de los cultivos bacterianos Tras la inoculación, se incubaron las 30 placas en estufa a procedimos a la siembra de las placas. Se utilizaron 15 pla- 37º C durante 18-20 horas, procediéndose a continuación a la cas para cada una de las especies. La siembra de las 30 pla- lectura de los halos de inhibición microbiana expresados en cas se realizó por escobillón de acuerdo con la técnica de Mau- milímetros. El valor de 5 se consideró como ausencia de inhi- rice y cols.(13). Tras la siembra realizamos en cada placa 4 poci- bición microbiana, ya que se corresponde con el diámetro de llos de 5 mm de diámetro. En cada uno de los cuatro pocillos Endodoncia 2009; 27 (Nº 1):7-12
L. Rodríguez-Varo, J. Pumarola, C. Canalda Media y desviación típica de los halos inhibi-
Media y desviación típica de los halos inhibi-
torios frente a E. faecalis (expresados en milí-
torios frente a A. israelí (expresados en milí-
Después de verificar, con los tests de Kolmogorov Smirnov ción microbiana de las pastas de hidróxido de calcio. La resis- y de Levene, que las variables no seguían una distribución tencia de determinadas bacterias a la acción del hidróxido normal y sus variancias no eran homogéneas, los datos se de calcio, pudiendo sobrevivir en medios de pH elevados, dio sometieron a las pruebas no paramétricas de Kruskal Wallis lugar a su combinación con el paramonoclorofenol alcanfora- do(15,16) y al uso de pastas antibióticas como medicación tem-poral, especialmente en los casos refractarios en los que pue-den existir especies bacterianas como E. faecalis, A. israelii y RESULTADOS
Pseudomonas aeruginosa resistentes al hidróxido de calcio(17,18).
La combinación del hidróxido de calcio con paramonocloro- En las Tablas 2 y 3 se muestran los resultados para cada fenol alcanforado aumenta ostensiblemente su eficacia frente una de las muestras frente a E. faecalis y A. israelí respectiva- a las cepas más resistentes como demostraron Siqueira y mente y en las Tablas 3 y 4 las medias y desviaciones típicas cols.(19). El efecto inflamatorio del paramonoclorofenol alcan- forado desaparece a los pocos días sin interferir en la repara- La actividad de inhibición antibacteriana mostrada frente a E. faecalis ha sido significativamente mayor (p< 0,05) con Sep- En un estudio in vitro, Stevens y Grossman(21) hallaron una tomixine forte (30,7 mm) seguida en orden decreciente por mayor capacidad antimicrobiana con el paramonoclorofenol Kri-3 (22,5 mm), Calcipulpe (16,6 mm) y Grinazole (11,4 mm).
alcanforado que con el hidróxido de calcio al igual que noso- Entre estas tres sustancias se observaron diferencias signifi- tros en este estudio. Sin embargo, Byström y cols.(5) obtuvie- ron un mejor resultado in vivo introduciendo una pasta acuo- La actividad de inhibición antibacteriana mostrada frente sa de hidróxido de calcio y manteniéndola en los conductos a A. israelii ha sido significativamente mayor (p< 0,05) con Sep- durante un mes que introduciendo unas puntas de papel tomixine forte (40,1 mm) seguida en orden decreciente por impregnadas en paramonoclorofenol alcanforado. El hidró- Kri-3 (36,6 mm), Grinazole (7,6 mm) y Calcipulpe (6 mm). Entre xido de calcio precisa como mínimo una semana para ser efec- estas tres sustancias se observaron diferencias significativas tivo y el paramonoclorofenol alcanforado pierde casi toda su acción en 24 horas. En este estudio la actividad del hidróxi-do de calcio y del paramonoclorofenol alcanforado se evaluóa las 18-20 horas, por tanto es posible que con un periodo de DISCUSIÓN
tiempo mayor el hidróxido de calcio hubiera obtenido mejo-res resultados. Además Calcipulpe® contiene una proporción El hidróxido de calcio ha sido durante muchos años la medi- baja de hidróxido de calcio (20%) en componente acuoso lo cación intracanal de elección. La medicación con hidróxido de cual también pudo influir en los resultados. calcio en el interior de los conductos radiculares de dientes En dientes con periodontitis, al predominar las bacterias infectados es una terapéutica que ha dado buenos resultados, anaerobias estrictas, una medicación con hidróxido de calcio especialmente en los casos de periodontitis apicales(14). Con durante una o dos semanas ha demostrado ser eficaz. Sin todo, sigue siendo un tema de debate la capacidad de inhibi- embargo, en los fracasos predominan las anaerobias faculta- Endodoncia 2009; 27 (Nº 1):7-12
Acción antimicrobiana in vitro de distintas medicaciones sobre Enterococcus faecalis y Actinomyces israelii tivas, especialmente E. faecalis. Algunos investigadores encon- Los bajos resultados obtenidos por la pasta Grinazole® res- traron que esta bacteria, presente en los túbulos dentinarios pecto a las otras sustancias testadas podrían ser debido a que de conductos inoculados con ella, no era destruida por el hidró- el metronidazol actúa frente a las bacterias anaerobias estric- xido de calcio tras un periodo de 10 días(22,23).
Para evitar las resistencias bacterianas se ha propuesto com- binar una solución de hidróxido de calcio con una moderadaproporción de paramonoclorofenol alcanforado, habiéndose CONCLUSIONES
obtenido buenos resultados con esta mezcla(24). El metronidazol es un antibiótico que inhibe los microor- Bajo las condiciones de este estudio, la pasta antibiótica ganismos anaerobios pero no los microorganismos aerobios o Septomixine forte ha obtenido mayores halos inhibitorios (p< microaerófilos. Se sabe que se convierte en varios interme- 0,05) que el resto de los medicamentos evaluados frente a las diarios de corta vida después de su difusión en un microor- especies bacterianas E. faecalis y A. israelii. ganismo anaeróbico. Estos productos reaccionan con el ADN La pasta antibiótica Grinazole ha mostrado mayor efica- y otras macromoléculas microbianas y producen la muerte cia (p< 0,05) frente a A. israelii que Calcipulpe y menor (p< celular. E. faecalis es un coco anaerobio facultativo microaeró- 0,05) que Kri-3. Grinazole ha obtenido menores halos inhibi- filo y A. israelii puede ser anaerobio estricto o anaerobio facul- torios frente a E. faecalis que Calcipulpe y Kri-3 (p<0,05). tativo. En nuestro experimento con el Grinazole®, pasta quecontiene metronidazol, obtuvo mayores halos inhibitorios fren-te a A. israelii que frente a E. faecalis. Este hecho concuerda con AGRADECIMIENTOS
lo esperado ya que el metronidazol es efectivo frente a las bac-terias anaerobias estrictas. Este trabajo se realizó en el laboratorio de Microbiología El sulfato de polimixina B actúa exclusivamente en la pared de la Facultad de Odontología de la Universidad de Barcelo- de las bacterias gram negativas. El E. faecalis es un coco gram na, dirigido por el Prof. Miguel Viñas. Catedrático de Micro- positivo y el A. israelii es un bacilo gram positivo, por lo que biología de la Facultad de Odontología.
los halos inhibitorios obtenidos por la sustancia Septomixineforte® debemos atribuirlo al sulfato de neomicina y la tirotri-cina que actúan sobre las bacterias grampositivas. BIBLIOGRAFÍA
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calcio en las reabsorciones radiculares y en los dientes reim- 2. Holland R, Soares IJ, Soares MI. Influence of irrigations and intraca- plantados(25,26). También en un estudio in vitro se observó una nal dressing on the healing process of dog´s teeth with apical perio-dontitis. Endod Dent Traumatol 1992; 8:223-229.
mayor lentitud en la eliminación y difusión de estas pastasal combinarlas con el hidróxido de calcio(27). Esta mezcla podría 3. Leonardo MR, Silva LAB, Leonardo RT, Utrilla LS, Assed S. Histo- logical evaluation of therapy using a calcium hydroxide dressing aportar las ventajas de ambas sustancias.
for teeth with incompletely formed apices and periapical lesions. J La sustancia antiséptica KRI-3® obtuvo mejor resultado frente a A. israelii que frente a E. faecalis con diferencias signi- 4. Sato T, Hoshimo E, Uematsu H, Noda T. In vitro antimicrobial sus- ficativas. Nuestros resultados coinciden con los hallados por ceptibility to combinations of drugs of bacteria from carious and endo-dontic lesions of human deciduous teeth. Oral Microbiol Inmunol La pasta de hidróxido de calcio Calcipulpe® obtuvo mayo- 5. Byström A, Claesson R, Sundqvist G. The antibacterial effect of camph- res halos inhibitorios frente a E. faecalis que frente a A. israelii. rated paramonochlorophenol, camphorated phenol, and calcium Los buenos resultados obtenidos por la pasta antibiótica hydroxide in the treatment of infected root canals. Endod Dent Trau-matol 1985; 1: 170-5.
Septomixine forte® frente a ambas bacterias podríamos atri-buirlo en ambos casos al sulfato de neomicina que actúa fren- 6. Estrela C, Pimenta FC, Yoko I, Bammann LL. In vitro determination of direct antimicrobial effect of calcium hydroxide. J Endod 1998; te a las bacterias gram positivas. Su otro componente el sul- fato de polimixina actúa frente a gram negativas. La tirotri- 7. Chong BS, Pitt Ford TR. The role of intracanal medication in root canal treatment. Int Endod J 1992; 25: 97-106.
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Source: http://www.medlinedental.com/pdf-doc/ENDO/antimicrobiana.pdf